高效液相色谱法操作流程

1. 准备工作：始终保持HPLC仪器的清洁，保持室内温度恒定，因为室温的变化对HPLC检测器有影响。准备好所有溶液、试剂、样品、标准溶液、注射剂等。

2. 注入流动相：将已经过滤并脱气的流动相注入储液罐。

3. 冲洗金属过滤器：用流动相冲洗金属过滤器，然后将过滤器浸入储液罐的流动相中。

4. 储液罐摆放：将储液罐放置在一定的高度，以避免由于搬运和其他操作人员的移动而造成不必要的跌落。

5. 启动HPLC：按以下顺序依次启动高效液相色谱仪：泵→检测器→高效液相色谱软件→按预先计划的方法设置软件参数，如分析时间、检测波长、流速等。

6. 排除气泡：启动泵，运行5分钟，主要是为了排除系统中的气泡，结束后关闭所有排气阀。

7. 走基线：然后按照预先计划的速度，以固定的速率（如1mL/min左右）运行流动相，走基线，直到基线平稳，就可以在计算机软件上进行监视。

8. 设置样品参数：基线平稳后，在软件中设置样品的运行参数，如流速和分析时间等。分析时间会因样品、流速、柱长等因素变化。

9. 注入样品：将固定体积的样品溶液注入进样阀，然后在软件中启动注入命令，进样器中的样品溶液就随流动相进入色谱柱。

10. 监测数据：通过软件监视各项读数，当检测器检测到样品所有峰值，停止运行并设置新的进样。

11. 分析结束：在下一个样品分析前，建议留出5-10分钟，待流动相通过色谱柱，以便清洗之前样品的残留物；确认基线稳定后，进行下一次注射。分析结束后，先关闭检测器，然后关闭泵，最后关闭软件。

需要注意的是，在操作过程中要遵循HPLC的注意事项，如使用0.2μm滤纸过滤溶剂或流动相，并进行超声脱气。同时，在启动时应采用色谱级水清洗色谱柱，有助于延长色谱柱的使用寿命、检测器的稳定运行，确保检测结果的准确性。